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更新時(shí)間：2024-11-05

大鼠精原細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠精原分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質(zhì)地堅(jiān)韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進(jìn)入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實(shí)質(zhì)，將實(shí)質(zhì)分為睪丸小葉，數(shù)量約為100～200。每個(gè)小葉內(nèi)約有2～4條生精小管，具有產(chǎn)生精子的作用；生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細(xì)胞，具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管)，精直小管進(jìn)入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng)，之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12～15條輸出小管通過睪丸后上緣進(jìn)入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方，由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞構(gòu)成，成人的生精小管有30～70cm長。精子的產(chǎn)生過程包括生精細(xì)胞的分化、支持細(xì)胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細(xì)胞并不是一種細(xì)胞，它是多種細(xì)胞的統(tǒng)稱，包括精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，最終形成精子進(jìn)入到管腔之中，并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細(xì)胞的收縮作用向下一級管腔移動(dòng)。精原細(xì)胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細(xì)胞。原始的胚細(xì)胞經(jīng)分化形成精原細(xì)胞，精原細(xì)胞經(jīng)復(fù)制形成初級精母細(xì)胞，初級精母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細(xì)胞，再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細(xì)胞。精細(xì)胞經(jīng)過變形最終形成精子。精原細(xì)胞屬于雄性生殖細(xì)胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進(jìn)行有絲分裂，增加細(xì)胞數(shù)量，并分化為精母細(xì)胞。精原細(xì)胞貼近基膜，細(xì)胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細(xì)胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀不變。在增殖過程中，通過精原細(xì)胞的分裂和分化，由精原細(xì)胞產(chǎn)生精母細(xì)胞，進(jìn)入成熟分裂，因而通過增殖可大大增加精母細(xì)胞的數(shù)量。按理論推算，一個(gè)精原細(xì)胞通過數(shù)次細(xì)胞分裂，可形成上百個(gè)初級精母細(xì)胞。但在生精過程早期，生精細(xì)胞很易發(fā)生變性，故實(shí)際上少于這個(gè)數(shù)字。在精原細(xì)胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細(xì)胞不再繼續(xù)分裂，而是保留下來，成為新的精原干細(xì)胞，因此通過增殖不僅能使精原干細(xì)胞不斷得到更新，且能使精原干細(xì)胞保持一定數(shù)量，從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進(jìn)行下去，不會枯竭。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>

　　7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；

　　4、長期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠精原采用混合酶多步消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠精原經(jīng)AP(堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、GDNF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：圓形、橢圓形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠精原體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代及凍存：

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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