技術(shù):通過(guò)PCR擴(kuò)增特定基因突變位點(diǎn),結(jié)合測(cè)序或熒光探針?lè)治觥?/div>
腫瘤分子診斷
致癌基因檢測(cè):如EGFR、KRAS、BRCA1/2突變檢測(cè),指導(dǎo)靶向治療。
微小殘留病灶(MRD)監(jiān)測(cè):通過(guò)PCR定量檢測(cè)術(shù)后循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)。
應(yīng)用:液態(tài)活檢、腫瘤早篩、治療療效評(píng)估。
2、科學(xué)研究
基因表達(dá)分析
mRNA定量:通過(guò)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)基因表達(dá)水平,研究疾病發(fā)生機(jī)制或藥物作用。
差異表達(dá)分析:比較正常與疾病組織、處理組與對(duì)照組的基因表達(dá)差異。
基因組編輯驗(yàn)證
CRISPR/Cas9編輯后檢測(cè):PCR擴(kuò)編輯位點(diǎn),結(jié)合測(cè)序驗(yàn)證基因敲除、插入或修復(fù)效果。
應(yīng)用:基因功能研究、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物/植物鑒定。
分子克隆與測(cè)序
PCR產(chǎn)物直接克?。簲U(kuò)增目的片段后克隆到質(zhì)粒載體中,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如蛋白表達(dá)、抗體制備)。
測(cè)序模板制備:通過(guò)PCR擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域,作為Sanger測(cè)序或高通量測(cè)序(NGS)的模板。
3、環(huán)境與食品安全
環(huán)境監(jiān)測(cè)
污染物檢測(cè):通過(guò)PCR檢測(cè)水中微生物(如大腸桿菌、弧菌)、土壤中的重金屬耐受基因。
生態(tài)研究:分析特定物種(如瀕危動(dòng)物、入侵生物)的分布,通過(guò)環(huán)境DNA(eDNA)進(jìn)行物種鑒定。
食品安全檢測(cè)
食源性病原體:檢測(cè)食品中的沙門(mén)氏菌、李斯特菌、諾如病毒等。
轉(zhuǎn)基因成分鑒定:通過(guò)PCR檢測(cè)大豆、玉米等作物中的轉(zhuǎn)基因序列(如CaMV 35S啟動(dòng)子、NOS終止子)。
摻假識(shí)別:鑒別肉類(lèi)、乳制品、蜂蜜等食品的真?zhèn)危ㄈ缥锓N特異性PCR)。
4、農(nóng)業(yè)與畜牧業(yè)
病害防控
植物病害:檢測(cè)水稻條紋葉枯病毒、小麥銹病、柑橘黃龍病等病原體。
動(dòng)物疫病:診斷流感、口蹄疫、非洲豬瘟等傳染病。
品種鑒定與育種
基因分型:通過(guò)PCR-SNP分析鑒別作物或畜禽品種(如雜交水稻純度檢測(cè))。
分子標(biāo)記輔助育種:利用PCR篩選與優(yōu)良性狀(如抗蟲(chóng)、抗旱)相關(guān)的基因標(biāo)記。
5、法醫(yī)學(xué)與親子鑒定
DNA指紋分析
STR分型:通過(guò)PCR擴(kuò)增短串聯(lián)重復(fù)序列(如CODIS系統(tǒng)),用于個(gè)體識(shí)別、現(xiàn)場(chǎng)物證分析。
線(xiàn)粒體DNA檢測(cè):用于毛發(fā)、骨骼等微量樣本的身份鑒定。
親子鑒定
通過(guò)PCR擴(kuò)增多個(gè)基因位點(diǎn)(如D21S11、TH01),計(jì)算親權(quán)概率。
6、特殊場(chǎng)景應(yīng)用
微量樣本檢測(cè)
降解DNA樣本:通過(guò)高靈敏度PCR試劑盒,從痕量、降解的DNA中擴(kuò)增目標(biāo)基因(如古DNA、法醫(yī)樣本)。
單細(xì)胞PCR:擴(kuò)增單細(xì)胞基因組,研究細(xì)胞異質(zhì)性或稀有細(xì)胞類(lèi)型。
現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)
便攜式PCR儀:結(jié)合凍干試劑盒,用于野外或基層醫(yī)療單位的即時(shí)檢測(cè)(如瘧疾、登革熱)。
數(shù)字PCR(dPCR):絕對(duì)定量檢測(cè)低頻突變或拷貝數(shù)變異(CNV),應(yīng)用于液體活檢、微生物計(jì)數(shù)。