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更新時間：2024-11-07

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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
殺菌；滲透增強蛋白樣檢測試劑盒  英文名稱:15-Hydroxydehydroabietic acid  純度：≥98%

死骨片1-泛素結合蛋白P62檢測試劑盒  英文名稱:9β,13β-Epidioxyabiet-8(14)-en-18-oic acid  純度：≥98%

轉錄激活因子MYB檢測試劑盒  英文名稱:6-Epidemethylesquirolin D  純度：≥98%

醌NADH脫氫酶1檢測試劑盒  英文名稱:Tanshinlactone  純度：≥98%

CCAAT增強子結合蛋白α檢測試劑盒  英文名稱:Przewalskin  純度：≥98%

甲基胞嘧啶雙加氧酶2檢測試劑盒  英文名稱:Deacetylpseudolaric acid A  純度：≥98%

淋巴增強因子-1檢測試劑盒  英文名稱:Pinusolidic acid  純度：≥98%

Runt相關轉錄因子1檢測試劑盒  英文名稱:Deacetylpseudolaric acid C2  純度：≥98%

跨膜受體蛋白Notch-1檢測試劑盒  英文名稱:Phytol  純度：≥98%

白細胞介素36γ檢測試劑盒  英文名稱:Isocupressic acid  純度：≥98%

受體激酶c-Met檢測試劑盒  英文名稱:Spiramilactone B  純度：≥97%

 英文名稱:Cinnzeylanol  純度：≥98%

血清淀粉樣蛋白A2檢測試劑盒  英文名稱:Bulleyanin  純度：≥98%

血清淀粉樣蛋白A4檢測試劑盒  英文名稱:Forskolin J  純度：≥98%

信號素3E檢測試劑盒  英文名稱:19-Hydroxybaccatin III  純度：≥99%

血管緊張素Ⅲ檢測試劑盒  英文名稱:2-Deacetoxytaxinine B  純度：≥90%
Ar A4 感受態(tài)細胞NIR1/RDGBA3  膜相關脂轉運蛋白一抗    * 0.2ml Elaidic acid

Fc ε RIα/Fc epsilon RI  FC段IgE受體α多肽一抗    * 0.1ml Heptadecanoic acid

ELL  聚合酶延伸因子一抗    * 0.2ml Heptadecanoic acid

KNDC1  腦蛋白9一抗    * 0.2ml Leucomalachite Green

KCC2/SLC12A5  神經細胞鉀離子轉運蛋白一抗    * 0.1ml Methyl Arachidate

SPP24/SPP2  分泌性蛋白24一抗    * 0.2ml Methyl ricinoleate

phosphoCaM I (Ser 101)  化鈣調節(jié)素一抗    * 0.1ml Methyl behenate

phosphoSYT6(Thr418)  化突觸蛋白6一抗    * 0.1ml Methyl tetracosanoate
操作方法：
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜，即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質合成的機器—核糖體，毫無例外地存在于一切細胞內，核糖體，是蛋白質合成的機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性，包括細胞自身的運動和細胞內部的物質運動
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
產品僅用于科研采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。