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更新時間:2024-11-04
小鼠神經(jīng)少突膠質前體細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
腦組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 雙極、多極形 | YS-01X7716 |
細胞簡介:
小鼠神經(jīng)少突膠質前體分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(灰質)覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標本中,少突膠質細胞比星狀膠質細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的成髓鞘神經(jīng)膠質細胞,其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是,細胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程,其形態(tài)、表達產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴格的界限,因此,其分類是相對的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell)。細胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質表面,具有很強的分裂增殖潛力,表達GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起,極少數(shù)為單極突起,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時為雙潛能細胞,既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質,故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,O2A)。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A2B5標記物,同時也表達O1-O4抗原,無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網(wǎng),大量表達半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,PLP)、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質細胞前體細胞(簡稱少突膠質細胞前體細胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞,前兩者具有增殖能力。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質采用消化、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2天半量換液1次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 雙極、多極形
傳代特性 不傳代,不增值,存活1-2周
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
血濃度測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
血0濃度測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
血濃度測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
血清總鐵結合能力測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human ai neuophil cytoplasmic aibody (cANCA) ELISA Kit 人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)試劑盒
HumansolublePhospholipaseA2,sPL-A2ELISAKit 人可溶性0脂酶A2(sPL-A2)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforABeta1-42ELISAKit大鼠β淀粉樣蛋白1-42
乙四乙酸(EDTA)細胞脫離溶液100毫升
MouseMyosin,MYSELISAKit小鼠肌球蛋白(MYS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
P選擇素/白細胞內皮細胞粘附分子3抗體
KB抑制蛋白激酶β單克隆抗體
F11R重組小鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein
ANPEN/CD13(Aminopeptidase N 0.5mgANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽酶N抗原
PA2G4重組人 EBP1 / PA2G4 蛋白 Protein
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白
CD68 Protein Rat 重組大鼠 CD68 / Macrosialin 蛋白
白介素7(IL7)重組蛋白 Recombinant Interleukin 7 (IL7)
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白
LILRB3重組小鼠 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 蛋白 Protein
IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白 (Fc 標簽)
GUCA1A重組人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
小鼠神經(jīng)少突膠質前體細胞大鼠肺癌腫瘤抑制因子1(TSLC1)試劑盒 ,英文名: TSLC1 ELISA Kit
Porcine soluble iercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) ELISA Kit 豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒
豬特定基因序列(Porcine)核酸試劑盒 48T
CLIAKitforMAO(Humanmonoamineoxidase)ELISAKit人單胺氧化酶
體液樣品組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性比色法定量試劑盒20次
ELISAKitSAA血清淀粉樣蛋白A
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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